随着大白菜基因组测序的完成(http://brassicadb.org/)，对这些数量巨大的基因结构和功能的验证就成为后基因组时代的重要任务(苏源等, 2011)，开展大白菜蛋白质组学研究将为大规模地直接研究这些基因功能提供强有力的工具。双向电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)技术是蛋白质组学研究中分析和分离复杂蛋白质样品最有效的手段之一(Görg et al., 2004)。近年来，双向电泳技术在农业生产中已广泛应用(柳展基等, 2006)，蛋白提取方法也各式各样。关于不同材料的蛋白质样品的制备研究已有很多报道(Damerval et al., 1986; Natarajan et al., 2005; 施涯邻等, 2011)，较常见的全蛋白提取方法有尿素-硫脲提取法、Tris-HCL法、酚法、Tris-丙酮-酚法、Trizol沉淀法和TCA丙酮沉淀法等。但目前，大白菜蛋白质组学研究尚属空白。不同植物、不同组织或不同生理状态下的植物材料其细胞和组织成分各不相同，因此必须针对大白菜花蕾特点对蛋白质的提取方法进行优化选择。

本研究采用六种全蛋白提取方法和不同蛋白浓度测定方法，经双向电泳分离及2-DE图谱比较分析，初步得到进行花蕾全蛋白提取和蛋白浓度测定的最佳方法，为进一步开展大白菜花器官蛋白质组学研究提供依据。

1结果与分析
1.1六种全蛋白提取方法比较
采用TCA丙酮沉淀法、Tris-HC1法、酚改良法、Trizol沉淀法、Tris-丙酮-酚法和尿素-硫脲提取法等六种方法分别提取花蕾全蛋白，采用蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，使用7 cm (pH 3~pH 10)胶条对所提蛋白进行双向电泳试验，上样量为250 μg，上样体积为125 μL。得到的2-DE图谱(图1)分析可知，尿素-硫脲法、Tris-HCL法和酚改良法得到的2-DE图谱(图1A-图1C)不仅蛋白质点较少，而且分布不均匀：如尿素/硫脲法所得蛋白点中偏碱性蛋白缺失，Tris-HCL法及酚改良法所得蛋白点中高分子量及偏酸、偏碱蛋白缺失，均不是较好的花蕾蛋白提取方法；而其余三种方法所得2-DE图谱(图1D-图1F)分布相对均匀，除Tris-丙酮-酚法所得的低分子量蛋白点较少外，TCA丙酮沉淀法和Trizol沉淀法得到的蛋白点较多，分辨率较高，但Trizol沉淀法较TCA丙酮沉淀法所得蛋白质点少。由此可知，TCA丙酮沉淀法为最佳花蕾蛋白提取方法，Trizol沉淀法效果次之。

图1 六种全蛋白提取方法所得的2-DE图谱 Figure 1 2-DE maps of the proteins extracted by the six extracting methods

1.2 Bradford法与蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度的比较
蛋白浓度测定的准确与否直接影响双向电泳上样量的准确性及所得2-DE图谱的质量。目前常用的蛋白浓度测定法有Bradford法及蛋白定量试剂盒法。本研究采用Tris-丙酮-酚法、Trizol沉淀法和TCA丙酮沉淀法等三种较好的蛋白提取方法提取花蕾蛋白质，并分别采用Bradford法及蛋白定量试剂盒法测定蛋白浓度，然后选用7 cm (pH 3~pH 10)胶条进行双向电泳试验，确定上样量均为250 μg，上样体积均为125 μL，对所得2-DE图谱(图2)进行比较，可见采用定量试剂盒法所得到的三个2-DE图谱(图2A-图2C)均比Bradford法所得的2-DE图谱(图2D-图2F)蛋白质点多，且分辨率高，由此可知定量试剂盒测定蛋白浓度更准确。

图2 Bradford法和蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度得到的2-DE图谱 Figure 2 2-DE maps of the proteins which concentration was determined by Bradford and Protein Assay kit

2讨论
蛋白样品制备是双向电泳的关键环节之一，不同的植物材料应选用不同的蛋白提取方法。目前较常见的全蛋白提取方法有尿素-硫脲提取法、Tris-HCL法、酚法、Tris-丙酮-酚法、Trizol沉淀法和TCA丙酮沉淀法等。关于蛋白提取方法的比较已有很多报道(Natarajan et al., 2005; 文李等, 2007; 王丽娟等, 2011; 李开拓等, 2011)，有的学者认为TCA丙酮沉淀法是最佳蛋白提取方法，如文李等(2007)、王丽娟等(2011)用TCA丙酮沉淀法、尿素-硫脲法、Tris-饱和酚法等分别对水稻花粉、菜籽的全蛋白进行提取，比较发现TCA丙酮沉淀法是最理想的提取方法；而有的学者认为Trizol沉淀法是较好的蛋白提取方法(陈晶瑜等, 2010; 康俊梅, 2008)。但前期研究都集中在水稻 (谢锦云等, 2003; 文李等, 2007)、小麦(王丽娟等, 2011; 叶景秀等, 2009)等主要农作物花器官的研究上，关于大白菜花蕾全蛋白提取的研究尚未见有报道。Isaacson等(2006)指出TCA丙酮沉淀法既耗时少易操作，又能够有效抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，去除样品中的酚类及色素等干扰物质，在植物全蛋白提取中显现出一定的优势。本试验采用六种方法提取大白菜花蕾全蛋白，比较发现TCA丙酮沉淀法得到的2-DE图谱分辨率高，点圆且分离均匀，是提取大白菜花蕾全蛋白最好的方法。该项研究为大白菜花器官蛋白质组学的研究奠定了基础。

蛋白浓度测定的准确与否直接影响双向电泳上样量的准确性及所得2-DE图谱的质量。目前常用的蛋白浓度测定法有Bradford法及蛋白定量试剂盒法。普遍认为，Bradford法具有灵敏度高、简便、成本低等优点，在植物全蛋白浓度测定中应用广泛(李炳坤和陈春明, 2009)。但李海玲等(2008)发现，用Bradford法测定不同植物蛋白浓度时偏差较大，去污剂、甘油、尿素等物质的存在会影响蛋白浓度的测定结果；陈志坚等(2011)研究表明蛋白定量试剂盒测定植物全蛋白浓度，能够有效避免干扰物质对测定结果的影响。目前，对于两种浓度测定方法的比较未见报道。本试验通过对两种蛋白浓度测定方法得到2-DE图谱比较，发现蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度更为精确，得到的2-DE图谱质量更高。该项研究为蛋白质组学研究提供了重要线索。

3材料与方法
3.1 试验材料
大白菜(Brassica rapa L. ssp. Pekinensis)品系AB01花蕾取自沈阳农业大学大白菜实验基地。2011年3月对种子春化处理，播种育苗，4月中旬定植于大白菜实验基地，5、6月份于抽薹开花期进行取样，随机选择长势相同的可育株主茎花蕾，称量分装，标好日期，液氮速冻，-80℃冰箱保存备用。以下各试验均进行3次生物学重复。

3.2试剂和仪器
IPG胶条(7 cm, pH 3~pH 10)、IPG Buffer、矿物油购于美国Bio-Rad公司；尿素、硫脲、CHAPS、十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、Tris碱、丙烯酰胺、N,N’-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、过硫酸铵(AP)、TEMED、碘乙酰胺(IAA)购于Sigma公司；Trizol购于Invitrogen公司；考马斯亮蓝R-350购于Amersham公司；其余试剂均为国产分析纯。

PROTEAN IEF Cell等电聚焦系统、PROTEAN plus Dodeca cell垂直电泳槽系统购于美国Bio-Rad公司；UMAX Power Look 2100XL光密度扫描仪购于台湾力捷公司；COOL TECH320冷却循环系统、SORVALL STRATOS台式高速冷冻离心机购于美国Thermo Scientific公司；SUNRISE酶标仪购于Tecan公司。

3.3全蛋白提取方法
3.3.1尿素-硫脲提取法
参照刘伟霞和潘映红(2007)的方法并进行了部分修改，把提取液组分中的CHAPS改换成2% SDS和2% Triton-114。取1 g花蕾液氮下研磨后转移至50 mL离心管中，加入8 mL的蛋白提取液(5 mol/L尿素, 2 mol/L硫脲, 2% SDS, 2% Triton-114, 2 μg/μL DTT)，漩涡震荡30 s；4℃下12 000 g离心15 min，收集上清液，加入3倍体积的冷丙酮，-20℃过夜；4℃下12 000 g离心30 min，将沉淀室温风干，-80℃冰箱保存。

3.3.2 Tris-HCL法
按照谷瑞升等(1999)的方法并进行部分修改。操作步骤为：取1 g花蕾液氮下研磨至粉末状，加入0.5 g PVPP和8 mL蛋白提取液(65 mmol/L Tris-HCL pH 6.8, 0.5% SDS, 10%甘油, 5% β-巯基乙醇)，样品混匀后，在振荡仪上4℃震荡浸提1 h，使蛋白质充分溶解，4℃下12 000 g离心20 min，用移液枪吸取上清液800 μL至新的离心管中，再加入10倍体积冷丙酮(含10% TCA)，-20℃过夜；4℃下10 000 g离心10 min，弃上清，沉淀用冷丙酮洗3次，室温风干，-80℃冰箱保存。

3.3.3酚改良法
按照Carpentier等(2005)的方法并进行改良。改良后的方法：取1 g花蕾置于研钵中，迅速加入3 mL提取液(0.1 mol/L Tris, 10 mmol/L EDTA, 0.44% DTT, 0.9 mol/L蔗糖, l mmol/L PMSF)，研磨均匀后，转移至50 mL离心管中，室温放置10 min，加入等体积pH 7.8的Tris-平衡酚，漩涡震荡10 min，4℃下12 000 g离心10 min，回收酚相，用等体积上述提取液抽提至水相基本不含色素(约2次)；加入5倍体积甲醇溶液(含0.1 mol/L乙酸铵)，-20℃过夜；4℃下14 000 rpm离心30 min，弃上清，沉淀用冷丙酮(含0.07 % DTT)洗3次，将沉淀室温风干，-80℃冰箱保存。

3.3.4 Tris-丙酮-酚法
按照Wang等(2006)的方法。操作步骤为：取1 g花蕾液氮下研磨至粉末状，转移至50 mL离心管中，加入10 mL丙酮(含10 % TCA)，漩涡混匀，4℃下16 000 g离心3 min，弃上清；加入10 mL 80 %甲醇溶液(含0.1 mol/L 醋酸铵)，漩涡混匀，4℃下16 000 g离心3 min，弃上清；再向离心管中加入80%丙酮，漩涡混匀，4℃下16 000 g离心3 min，弃上清；室温条件下，将沉淀孵化10 min，挥去残留的丙酮，加入0.4~0.8 mL/0.1 g原始样品的Tris-平衡酚(pH 8.0)，4℃下18 000 g离心3 min，回收上层酚相；加入10 mL甲醇(含0.1 mol/L乙酸铵)，-20℃过夜；4℃下16 000 g离心5 min，弃上清，沉淀用10 mL 100%甲醇洗一次，10 mL 80%丙酮洗一次，将沉淀室温风干，-80℃冰箱保存。

3.3.5 Trizol沉淀法
按照康俊梅(2008)的方法。操作步骤为：取1 g花蕾，液氮研磨至粉末状，转移到50 mL离心管中，加入10 mL Trizol，室温放置5 min，按0.2 mL氯仿每1 mL Trizol加入氯仿，漩涡振荡15 s，室温孵育2~3 min，4℃下12 000 g离心15 min，去除上层水相RNA；按0.3 mL无水乙醇每1 mL Trizol沉淀中间层和下层酚相中的DNA，漩涡混匀，4℃下20 000 g离心5 min，收集上清液(约0.8 mL上清每1 mL Trizol)，转移至新的离心管中；按1.5 mL异丙醇每1 mL Trizol加入异丙醇，室温孵育10 min，4℃下15 000 g离心10 min，弃上清；沉淀用10 mL 95%乙醇(含0.3 mol/L盐酸胍)洗3次，再用10 mL无水乙醇洗1次，将沉淀真空干燥，-80℃冰箱保存。以上实验均需在冰上进行。

3.3.6 TCA丙酮沉淀法 
按照Damerval等(1986)的方法。操作步骤为：取1 g花蕾液氮研磨至粉末状，转移至50 mL离心管中，加入20 mL预冷的丙酮(含10 % TCA, 0.07 % DTT)，-20℃沉淀过夜；4℃下15 000 rpm离心1 h，弃上清，加入20 mL预冷的丙酮(含0.07% DTT)，-20℃沉淀1 h (期间摇晃几次)，4℃下15 000 rpm离心1 h，弃上清；重复上述步骤2次(以上步骤应快速进行, 防止蛋白降解)，沉淀室温吹干，挥去残余的丙酮，-80℃冰箱保存。

3.4全蛋白样品溶解及浓度测定
全蛋白样品加入1 mL裂解液(7 mol/L尿素, 2 mol/L硫脲, 4% (w/v) CHAPS, 65 mmol/L DTT, 2% (v/v) IPG Buffer)，采用振荡仪室温震荡2 h，超声波细胞粉碎机搅拌5 min，4℃下15 000 rpm离心1 h，上清液即为全蛋白样品液。分别采用蛋白定量试剂盒(2-D Quant-Kit, GE-Healthcare)和Bradford法进行蛋白浓度测定，牛血清蛋白(BSA)制作标准曲线，依据标准曲线计算样品蛋白浓度，比较两种蛋白定量方法所获得的2-DE图谱。

3.5双向电泳
第一向等电聚焦(IEF)采用7 cm，pH 3~pH 10的IPG胶条。分别吸取含250 μg蛋白的不同样品液，用水化液(7 mol/L尿素, 2 mol/L硫脲, 2% (w/v) CHAPS, 18 mmol/L DTT, 0.5% (v/v) IPG Buffer, 0.002%溴酚蓝)补足至125 μL，移入水化盘中，放入IPG胶条，覆盖矿物油，置于等电聚焦仪中，20℃主动水化12 h，电压和时间参数为：250 V (线性30 min)→500 V (快速30 min)→4 000 V (线性3 h)→4 000 V (快速20 000 V•h)→500 V (快速24 h)。

第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳采用胶浓度为12%的SDS-PAGE胶。将胶条依次在2 mL (含2%DTT)平衡液(6 mol/L Urea, 2% SDS, 0.375 mol/L Tris-HCl (pH 8.8), 20% glycerol)和2 mL (含2.5% IAA)平衡液中平衡15 min，经电泳缓冲液(25 mmol/L Tris, 192 mmol/L glycine, 0.1% SDS, pH 8.3)润洗后，转移至SDS-PAGE胶上，放入垂直电泳槽内，80 V电泳10 min后，调整电压至150 V继续电泳，待溴酚蓝指示剂到达距胶体底部1 cm左右时停止电泳。考马斯亮蓝R-350热考染15 min，10%醋酸振荡脱色。采用UMAX Powerlook 2100XL型光密度扫描仪对凝胶进行扫描照相。

作者贡献
周雪是本研究的实验设计和实验研究的执行人，完成图谱分析及论文初稿的写作；冯辉是项目的构思者，提供课题经费资助；冀瑞琴是项目的构思者及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终的文本。

致谢
本研究由国家自然科学基金资助项目(31272157)资助。

参考文献
Carpentier S.C., Witters E., Laukens K., Deckers P., Swennen R., and Panis B., 2005, Preparation of protein extracts from recalcitrant plant tissues: An evaluation of different methods for two-dimensional gel electrophoresis analysis, Proteomics, 5(10): 2497-2507
http://dx.doi.org/10.1002/pmic.200401222
PMid:15912556 
 
Chen J.Y., Guo B.F., He F.L., Qu C.H., Yin K.X., Yang H.D., and Zhao C.S., 2010, Comparison of protein extraction methods of plant for two-dimensional electrophoresis, Zhongguo Nongxue Tongbao (Chinese Agricultural Science Bulletin), 6(23): 97-100 (陈晶瑜, 郭宝峰, 何付丽, 曲春鹤, 尹克鑫, 杨洪达, 赵长山, 2010, 适合双向电泳的植物全蛋白提取方法比较, 中国农学通报, 26(23): 97-100) 
 
Chen Z.J., Yan W., Sun L.L., Liu G.D., Liao H., and Tian J., 2011, Establishment and optimization of two dimensional electrophoresis system for analyzing protein profiles in stylo roots, Zhiwu Shengli Xuebao (Plant Physiology Communications), 47(2): 199-204 (陈志坚, 严炜, 孙丽莉, 刘国道, 廖红, 田江, 2011, 建立和优化双向电泳分析柱花草根系蛋白谱的方法, 植物生理学报, 47(2): 199-204) 
  
Damerval C., de Vienne D., Zivy M., and Thiellement H., 1986, Technical improvements in two-dimensional electrophoresis increase the level of genetic variation detected in wheat-seedling proteins, Electrophoresis, 7(1): 52-54
http://dx.doi.org/10.1002/elps.1150070108
 
Görg A., Weiss W., and Dunn M.J., 2004, Current two-dimensional electrophoresis technology for proteomics, Proteomics, 4(12): 3665-3685
http://dx.doi.org/10.1002/pmic.200401031
PMid:15543535 
 
Gu R.S., Liu Q.L., Chen X.M., and Jiang X.N., 1999, An improved method of 2d electrophoresis for protein analysis of woody plant, Beijing Linye Daxue Xuebao (Journal of Beijing Forestry University), 21(5): 7-10 (谷瑞升, 刘群录, 陈雪梅, 蒋湘宁, 1999, 一种省时高效的木本植物蛋白双向电泳分析方法, 北京林业大学学报, 21(5): 7-10) 
  
Isaacson T., Damasceno C.M., Saravanan R.S., He Y.H., Catala C., Saladie M., and Rose J.K., 2006, Sample extraction techniques for enhanced proteomic analysis of plant tissues, Nat. Protoc., 1(2): 769-774
http://dx.doi.org/10.1038/nprot.2006.102
PMid:17406306 
 
Kang J.M., 2008, Study on the physiological and biochemical response and differentially expressed proteome under cold stress in buffalo grass, Dissertation for Ph.D., Chinese Academy of Agricultural Sciences, Supervisor: Gao H.W., pp.44-50 (康俊梅, 2008, 低温胁迫下野牛草生理生化响应及蛋自质组学研究, 博士学位论文, 中国农业科学院, 导师: 高洪文, pp.44-50)
 
 
Li B.K., and Chen C.M., 2009, Investigation for measurement methods of protein nitrogen and non-protein nitrogen (Melamine), Jiangxi Huagong (Jiangxi Chemical Industry), (1): 7-10 (李炳坤, 陈春明, 2009, 蛋白氮与非蛋白氮(三聚氰胺)的测定方法研究, 江西化工, (1): 7-10) 
  
Li H.L., Peng S.M., Li L., and Zhang X.M., 2008, Studies on four conventional methods for protein determination, Zhongguo Shenghua Yaowu Zazhi (Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics), 29(4): 277-278 (李海玲, 彭书明, 李凛, 张雪梅, 2008, 4种常用蛋白浓度测定方法的比较, 中国生化药物杂志, 29(4): 277-278) 
  
Li K.T., Guo Z.X., Pan D.M., Zhong F.L., and Pan T.F., 2011, Extraction of tonal protein from litchi pericarp and establishment of two-dimensional electrophoresis, Redai Yaredai Zhiwu Xuebao (Journal of Tropical and Subtropical Botany), 19(1): 69-74 (李开拓, 郭志雄, 潘东明, 钟凤林, 潘腾飞, 2011, 荔枝果皮总蛋白质提取及双向电泳体系的建立, 热带亚热带植物学报, 19(1): 69-74) 
  
Liu W.X., and Pan Y.H., 2007, Sample preparation methods suitable for wheat leaf proteome analysis, Zhongguo Nongye Kexue (Scientia Agricultura Sinica), 40(10): 2169-2176 (刘伟霞, 潘映红, 2007, 适用于小麦叶片蛋白质组分析的样品制备方法, 中国农业科学, 40(10): 2169-2176) 
  
Liu Z.J., Yang X.H., and Bi Y.P., 2006, Proteomics and its application in the agriculture, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 4(3S): 106-110 (柳展基, 杨小红, 毕玉平, 2006, 蛋白质组学在农业中的应用, 分子植物育种, 4(3S): 106-110) 
  
Natarajan S., Xu C., Caperna T.J., and Garrett W.M., 2005, Comparison of protein solubilization methods suitable for proteomic analysis of soybean seed proteins, Anal. Biochem., 342(2): 214-220
http://dx.doi.org/10.1016/j.ab.2005.04.046
PMid:15953580 
 
Shi Y.L., Wang J.Z., Wang Z.Q., Meng J.R., Luo X.L., and Chen B.S., 2011, Methods of preparation of high quality total rna and total protein from cassava tissues of root, Stem, and Leaves, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), Vol.9 No.67 pp.1492-1496 (施涯邻, 王金子, 王志强, 蒙姣荣, 罗兴录, 陈保善, 2011, 高质量木薯根、茎、叶总RNA和总蛋白样品的制备方法, 分子植物育种(online) Vol.9 No.67 pp.1492-1496) 
  
Su Y., Yu P., Kong C.S., Cai Y.Y., Yang J., Liu L., and Li C.Y., 2011, Preliminary study of the total proteins of roots, stems and leaves in wheat seedling using two-dimensional electrophoresis, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), Vol.9 No.49 pp.1366-1372 (苏源, 余萍, 孔垂思, 蔡翌阳, 杨静, 刘林, 李成云, 2011, 小麦幼苗根、茎和叶蛋白质双向电泳的初步研究, 分子植物育种(online) Vol.9 No.49 pp.1366-1372) 
  
Wang L.J., Ren X.M., Du Y.H., Zhang Q.B., Luo S.Z., Jiang S.T., and Zheng Z., 2011, Optimization of two-dimensional electrophoresis technology system for rapeseed proteome, Anhui Nongyo Kexue (Journal of Anhui Agricultural Sciences), 39(17): 10178-10181 (王丽娟, 任学敏, 杜艳慧, 张其彬, 罗水忠, 姜绍通, 郑志, 2011, 菜籽蛋白质组双向电泳技术体系的优化研究, 安徽农业科学, 39(17): 10178-10181) 
  
Wang W., Vignani R., Scali M., and Cresti M., 2006, A universal and rapid protocol for protein extraction from recalcitrant plant tissues for proteomic analysis, Electrophoresis, 27(13): 2782-2786
http://dx.doi.org/10.1002/elps.200500722
PMid:16732618 
 
Wen L., Liu G., Li S.Q., Li G.M., Tao J., and Zhu Y.G., 2007, Establishment and application of two-electrophoresis analysis of proteins from rice pollen, Zhongguo Shuidao Kexue (Chinese Journal of Rice Science), 21(1): 13-19 (文李, 刘盖, 李绍清, 李国民, 陶钧, 朱英国, 2007, 水稻花粉总蛋白质双向凝胶电泳方法建立及应用, 中国水稻科学, 21(1): 13-19) 
  
Xie J.Y., Li X.L., Chen P., Cao M.L., Chen L.B., and Liang S.P., 2003, Preliminary proteomic analysis of proteins of thermo-sensitive genetic sterile rice anther, Zhongguo Shengwu Huaxue Yu Fenzi Shengwu Xuebao (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology), 19(2): 215-221 (谢锦云, 李小兰, 陈平, 曹梦林, 陈良碧, 梁宋平, 2003, 温敏核不育水稻花药蛋白质组初步分析, 中国生物化学与分子生物学报, 19(2): 215-221) 
  
Ye J.X., Zhang G.S., Wang S.P., Chen R.H., Wang J.S., Niu N., Ma S.C., Li H.X., and Zhu J.C., 2009, Differential proteomic studies on pollen grain proteins of wheat male sterile line induced by chemical hybridizing agent SQ-1, Chinese Zhongguo Shengwu Huaxue Yu Fenzi Shengwu Xuebao (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology), 25(10): 949-957 (叶景秀, 张改生, 王书平, 陈蕊红, 王俊生, 牛娜, 马守才, 李红霞, 朱建楚, 2009, 杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育花粉粒差异蛋白质组学研究, 中国生物化学与分子生物学报, 25(10): 949-957)