赵安瑾 , 崔峥 , 杨文汉 , 李霆格 , 裴慧卿 , 王健^*

海南大学热带农林学院, 环南海陆域生物多样性研究中心, 海口, 570228
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 27 篇   
收稿日期: 2017年10月27日    接受日期: 2017年11月18日    发表日期: 2018年03月30日

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实时荧光定量PCR是目前验证基因表达量的首选方法之一，现也广泛应用于miRNA的表达量研究中，但在蝴蝶兰中尚未见报道。在实时荧光定量PCR检测miRNA体系中，cDNA模板浓度以及miRNA扩增引物长短和二级结构造成的退火温度的差异会直接影响PCR扩增效率，从而降低实验结果的可信度。针对该问题，本研究首次以蝴蝶兰miR858在花萼色斑与非色斑的差异表达为实例，通过对cDNA模板浓度以及退火温度的筛选，成功地优化了蝴蝶兰miRNA荧光定量体系。结果表明：蝴蝶兰miRNA858在退火温度65℃，与2 μg RNA对应的模板cDNA进行10倍稀释后扩增结果最优。本研究为蝴蝶兰miRNA荧光定量PCR标准体系的构建提供了实验依据。

miRNA；实时荧光定量PCR；蝴蝶兰