王硕^1,2* , 刘姣^2* , 符少萍² , 段瑞军² , 李瑞梅 ² , 姚远² , 胡新文¹ , 郭建春^2**

1 海南大学热带农林学院, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海口, 571101
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 10 篇   
收稿日期: 2017年07月29日    接受日期: 2017年08月29日    发表日期: 2018年07月09日

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本研究以木薯为材料，通过 RT-PCR 克隆出了 MeCREB 基因，核酸序列分析表明，所克隆的基因与phytozome 数据库收录的 MeCREB 基因(Manes.04G058300.1)序列基本一致。MeCREB 基因全长 968 bp，其中开放性阅读框(ORF)为 747 bp，编码 248 个氨基酸，预测得出 MeCREB 蛋白是一个不稳定的亲水性蛋白，编码蛋白质的分子量为 26.26 kD，理论等电点为 5.99，GRAVY 为 -0.667。构建 MeCREB-pGEX-6p-1 表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，并对影响重组蛋白表达的 4 个主要因素(诱导温度, 诱导起始菌量, IPTG 浓度及诱导时间)进行优化，确定 GST-MeCREB 融合蛋白的最适表达条件。结果表明：重组工程菌生长至OD600=0.8 时加入终浓度为 0.1 mmol/L 的 IPTG，在 28℃下诱导 6 h，最适合 GST-MeCREB 融合蛋白的表达。本研究为高效诱导获得 GST-MeCREB 融合蛋白用于下游实验提供了最优方案，并为进一步研究 MeCREB基因的生物学功能奠定了基础。

木薯； MeCREB；基因克隆；原核表达； 条件优化