季新 , 陈会杰 , 晏云 , 李飞 , 孙红正 , 张静 , 李俊周 , 彭廷 , 杜彦修^* , 赵全志^*

河南农业大学农学院, 河南粮食作物协同创新中心, 河南省水稻生物学重点实验室, 郑州, 450002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 18 篇   
收稿日期: 2017年07月20日    接受日期: 2017年08月10日    发表日期: 2018年04月01日

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水稻OsbHLH116基因属于bHLH家族转录因子。本研究依据简易RNAi技术原理，在OsbHLH116基因编码区选取一段60 bp序列作为干扰目的片段，根据目的片段序列化学合成2条长寡核苷酸链，使其3′端9个碱基互补配对，经退火延伸得到具有反向重复序列的小干扰片段。小干扰片段和载体pTCK303经一次酶切和连接即可得到OsbHLH116-RNAi表达载体。经菌落PCR验证后利用农杆菌介导法转化水稻品种新丰2号，利用GUS染色筛选获得转基因阳性植株。通过qRT-PCR对选取的三组转基因株系中OsbHLH116基因表达量验证，结果显示OsbHLH116基因表达极显著降低，表明OsbHLH116基因简易RNAi载体构建成功并发挥干扰作用。对OsbHLH116基因功能进行初步分析发现，与野生型新丰2号相比，OsbHLH116-RNAi株系种子萌发率显著降低。

 

水稻；OsbHLH116；RNA干扰；载体构建；种子萌发