叶新如^1,,2,3 , 朱海生^1,,2,3 , 温庆放^1,,2,3 , 刘建汀^1,,2,3 , 王彬^1,,2,3 , 陈敏氡^1,,2,3 , 张前荣^1,,2,3

1福建省农业科学院作物研究所, 福州, 350013;
2福建省农业科学院蔬菜研究中心,福州, 350013;
3福建省蔬菜工程技术研究中心,福州, 350013
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16 卷, 第 25 篇   
收稿日期: 2017年06月29日    接受日期: 2017年07月18日    发表日期: 2018年05月22日

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以丝瓜基因组DNA为模板，对ISSR反应中主要5个影响因素Mg²⁺浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度和DNA模板浓度，建立丝瓜ISSR-PCR反应的体系。根据实验确定的最佳反应体系为：25Μl ISSR体系为：50 ng DNA，0.2 mmol/L dNTP ，1U Taq酶，0.4 umol/L的单条引物，2.5 μL 10×Buffer，2.0 mmol/L Mg²⁺。在此基础上，对12条引物的退火温度进行优化。最终选用60个丝瓜品种进行所确立扩增体系及扩增程序进行验证，检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、亮度高和重复性好，表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于丝瓜的ISSR分子标记。

丝瓜；体系优化；ISSR