孙珊珊¹ , 王春生² , 朱婷婷¹ , 赵贺¹ , 焦耀磊¹ , 曲硕¹ , 王丕武^1*

1 吉林农业大学农学院, 长春, 130118; 2 吉林农业大学园艺学院, 长春, 130118
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2022 年, 第 20卷, 第 20 篇   
收稿日期: 2020年11月13日    接受日期: 2020年11月20日    发表日期: 2023年03月03日

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单一的抗病、抗虫品种已经不能满足需求，因此，本研究通过基因工程技术构建同时具有抗病基因 NPR1 基因和抗虫基因 Cry1Ab13-1 基因并以 bar 基因为筛选标记的植物双价表达载体并进行遗传转化，以获得优良的特点同时兼具抗病抗虫的新株系。通过农杆菌介导法、花粉管通道法和超声波介导法将构建好的植物表达载体在玉米中进行遗传转化，并对 T₂ 代转基因植株进行 PCR 检测、Southernblotting 整合度检测、实时荧光定量 PCR 转录水平检测、室外抗虫以及室内抗病初步鉴定。结果表明：共获得 T₂ 代 PCR 阳性植株 14 株。Southern Blot 结果表明，NPR1 和 Cry1Ab13-1 双价基因已经分别以单拷贝形式整合到玉米受体中。实时荧光定量 PCR 结果表明 NPR1 和 Cry1Ab13-1 双价基因在不同组织间相对表达量均高于阴性对照，NPR1 基因在根、茎、叶中相对表达量均值分别为 3.302、1.45、9.75；Cry1A b13-1 基因在根、茎、叶中相对表达量均值分别为 3.15、1.61、9.89。室外接虫抗虫性鉴定结果表明阳性植株接虫处理 7 d 后虫子存活率为3.28%，而 10 d 后虫子存活率为 2.06%，抗虫级别由受体的感虫级别提高到中抗级别；室内抗病鉴定表明阳性植株抗病等级为高抗，而受体植株则为中抗，抗病能力明显提高。

玉米；NPR1 基因；Cry1A b13-1 基因；抗病性；抗虫性